Ribotyping and virulence markers of Yersinia pseudotuberculosis strains isolated from animals in Brazil

Ribotyping and virulence markers has been used to investigate 68 Yersinia pseudotuberculosis strains of serogroups O:1a and O:3. The strains were isolated from clinical material obtained from healthy and sick animals in the Southern region of Brazil. Ribotypes were identified by double digestion of extracted DNA with the restriction endonucleases SmaI and PstI, separation by electrophoresis and hybridization with a digoxigenin-labeled cDNA probe. The presence of the chromosomal virulence marker genes inv, irp1, irp2, psn, ybtE, ybtP-ybtQ, and ybtX-ybtS, of the IS100 insertion sequence, and of the plasmid gene lcrF was detected by polymerase chain reaction. The strains were grouped into four distinct ribotypes, all of them comprising several strains. Ribotypes 1 and 4 presented distinct profiles, with 57.3 percent genetic similarity, ribotypes 2 and 3 presented 52.5 percent genetic similarity, and genetic similarity was 45 percent between these two groups (1/4 and 2/3). All strains possessed the inv, irp1, and irp2 genes. Additionally, strains of serogroup O:1a carried psn, ybtE, ybtP-ybtQ, ybtX-ybtS, and IS100. As expected lcrF was only detected in strains harboring the virulence plasmid. These data demonstrate the presence of Y. pseudotuberculosis strains harboring genotypic virulence markers in the livestock from Southern Brazil and that the dissemination of these bacteria may occur between herds.

Análise farmacognóstica e atividade antibacteriana de extratos vegetais empregados em formulação para a higiene bucal / Herbal extracts in an experimental mouthwash: pharmacognostics analysis and antibacterial activity

A utilização de extratos vegetais vem se tornando uma alternativa importante para a prevenção de doenças periodontais. Este trabalho objetivou desenvolver uma formulação de enxagüatório bucal, contendo, em associação, extratos hidroalcoólicos de Rosmarinus officinalis, Plantago major, Tabebuia impetiginosa, Achillea millefollium e Nasturtium officinale; avaliar sua composição farmacognóstica e sua atividade antibacteriana, como também da fórmula proposta. Foram realizados estudos de pré-formulação e análises farmacognósticas para as espécies vegetais. A atividade antibacteriana in vitro foi observada por meio dos métodos de difusão em disco de papel, por hole- plate e por template, frente a Staphylococcus aureus, Bacillus subtilis, Escherichia colik, Enterococcus faecalis e Pseudomonas aeruginosa. A concentração inibitória mínima (CIM) foi determinada por meio do método de macrodiluições sucessivas em caldo. Os resultados obtidos apresentaram-se de acordo com o histórico farmacognóstico das drogas estudadas. Todas as bactérias foram inibidas pelos extratos, observando-se que as espécies S. aureus e B. subtilis mostraram, aparentemente, maior sensibilidade. A CIM variou, em relação a sensibilidade de cada espécie bacteriana estudada, de 312,5 æL/mL a 1250 æL/mL para os extratos vegetais e de 625 æL/mL a 2500 æL/mL para o enxaguatório bucal. São necessários estudos complementares para a confirmação da eficácia deste produto e sua utilização na prevenção de doenças periodontais.

In this study, herbs and hidroalcoholic extracts of Nasturtium officinale, Rosmarinus officinalis, Tabebuia impetiginosa, Plantago major and Achillea millefollium, were investigated for pharmacognostics analysis (flavonoids, alkaloids, tanins, saponins and antraquinones) and antibacterial activity (against Staphylococcus aureus, Bacillus subtilis, Escherichia coli, Enterococcus faecalis e Pseudomonas aeruginosa). In vitro antibacterial studies were carried by the disc diffusion method, hole plate and tamplate. The minimum inhibitory concentration (MIC) values were determinated by broth dilution method. The extracts were incorporated in mouthwash for periodontal diseases treatment. The pharmacognostics studies showed that herbs and extracts have substances groups described in literature. The antibacterial studies showed that extracts and mouthwash have some activity against all considered bacteria. S. aureus and B. subtilis showed, apparently, to be species more susceptible. Investigation of the MIC showed 312,5 æL/mL-1250 æL/mL for extracts and 625 æL/mL-2500 æL/mL for mouthwash. The studies served as initial quality control of the obtained cosmetic, enhancing anti-inflammatory (flavonoids) and/or antibacterial activities (tanins). However, new studies are necessary to confirm the cosmetic efficacy for treatment periodontal diseases.

Marcadores de virulência em Aeromonas spp isoladas de materiais clínicos humanos e de água doce / Virulence markers in Aeromonas spp isolated from human clinical materials and fresh water

Foram estudadas 88 cepas de Aeromonas isoladas de materiais clínicos de humanos e de água doce. Dessas, 31 foram isoladas de fezes diarréicas, 10 de fezes näo diarréicas, 39 de material humano extra-intestinal e oito de água. Essas cepas foram estudadas quanto ao perfil de virulência. Foram submetidas aos seguintes testes: adesäo e invasäo em células Hela, produçäo de citotoxina, enterotoxina, hemolisinas alfa e beta, auto-aglutinaçäo a 37ºC, resistência ao soro humano normal, absorçäo do Vermelho Congo, isolamento e extraçäo de plasmídeo. Os marcadores de virulência foram caracterizados em proporçöes variadas: 68,2 por cento aderiram e 45,5 por cento invadiram células HeLa, 36,4 por cento produziram citotoxina, 31,8 por cento enterotoxina, 100 por cento produziram hemolisina ß e 34,1 por cento produziram hemolisina alfa quando semeadas em profundidade nas placas de ágar sangue, 73,9 por cento produziram hemolisina ß e 47,7 por cento hemolisina alfa em microplacas, 17 por cento auto-aglutinaram a 37ºC, 31,8 por cento foram resistentes ao soro humano e 100 por cento absorveram o Vermelho Congo. Das cepas estudadas, 8 por cento apresentaram um ou mais plasmídeos de tamanho variado. Conclui-se pela pouca correlaçäo entre fatores de virulência e tipo de material clínico com exceçäo da citotoxina que foi encontrada com maior freqüência em cepas isoladas de infecçöes extra-intestinais e a enterotoxina mais comum em fezes diarréicas.

Evaluation of different techniques for the differentiation of pathogenic and non pathogenic strains of Yersinia enterocolitica

Diferentes métodos e testes para avaliar o potencial patogênico de Y. enterocolitica de sorotipos diversos têm sido utilizados. Testamos 60 cepas do microrganismo, sendo 25 de origem humana (sorotipo 03 biotipo 4 e sorotipo 05 biotipo 1): 6 de origem animal (sorotipo 03 biotipo 4 ); 19 isoladas do meio ambiente (sorotipo 05.27 biotipos 1 e 2 ) isoladas de alimentos (sorotipo 05 biotipo 1 e sorotipo 05.27 biotipo 1 ). Foram utilizados testes relacionadosà expressäo de genes plasmidiais (autoaglutinaçäo, dependência ao cálcio a 37ºC e absorçäo do corante Vermelho Congo), de genes cromossomais (presença de enzima pirazinamidase, fermentaçäo da salicina e hidrólise da esculina) além do teste de invasäo em células HEp-2. Todas as Y enterocolitica 03 exceto uma, foram potencialmente patogênico frente aos testes pirazinamidase-salicina-escalina, o mesmo näo ocorrendo com os testes relacionados a genes plasmidiais, quando os resultados näo foram täo uniformes, provavelmente pela perda do plasmídeo; o teste de invasibilidade em células HEp-2 apresentou os resultados monos uniformes. As cepas de Y. enterocolitica 05 também tiveram comportamento uniforme, sendo näo potogênicas frente aos dois grupos de testes (plasmidiais e cromossomais); em relaçäo ao teste de invasäo em células HEp-2 näo houve uniformidade. As cepas do sorotipo 05.27 biotipo 1, mostraram-se uniformes em relaçäo aos testes cromossomais, sendo näo patogênicas; näo apresentaram no entanto, resultados conclusivos nos testes relacionados à genes plasmidiais e invasäo em células HEp-2. Conclui-se que os testes relacionados a genes cromossomais (esculinasalicina-pirazinamidase) säo simples e muito eficazes na detecçäo de Y. enterocolitica potencialmente patogênicas, originárias de caos clínicos

Characterization of plasmid-related antigen of Yersinia enterocolitica by immunological techniques

Yersínia enterocolitica tem sua virulência relacionada a plasmídeo de 40-48-MDa que codifica proteínas que podem ser expressas nas membranas ou excretadas no meio de cultura. Procurou-se determinar o perfil dessas proteínas em cepas de Y. enterocolitica com e sem o plasmídeo de 40-48-MDa, através de gel de poliacrilamida com SDS (SDS-PAGE). Procurou-se também estudar as condiçöes ótimas de cultura de bactérias para expressäo dessas proteínas e finalmente analisá-las empregando a técnica de Immunoblot e utilizando anti-soro preparado com a amostra com e sem plasmídeo. Esses estudos resultaram na demonstraçäo da ocorrência, entre outros, de uma proteína de 38-kDa, presente apenas na cepa com plasmídeo e que era excretada quando o cultivo era realizado a 37ºC em meio de MOX